Tinción de gram
Objetivo:
En esta
práctica vamos a realizar otro tipo de tinción diferente, que además es la más
importante de todas ya que se emplea para diferenciar entre las bacterias Gran
(+) y Gram (-), todo esto gracias a sus propiedades de la pared celular
Materiales:
- Mechero Bunsen
- Portaobjetos
- Asa de platino
- Pipeta Pasteur
- Colorantes de Gram (cristal violeta, lugol,
alcohol ‐ acetona, safranina )
- Agua destilada estéril
- Cristalizador, barras paralelas, frasco
lavador, microscopio
- Muestra bacteriana
Procedimiento:
-1: Lo
primero que tenemos que hacer es preparar la extensión de la muestra ( No vamos
a profundizar en esta ya que ya lo hemos comentado en prácticas anteriores)
-2: Ahora que dejamos unos minutos la extensión
al aire libre, para que así este se seque
-3: Después vamos a hacer la fijación de las
bacterias en porta como ya vimos
-4: Por últimos haremos la coloración de la
extensión, colocando los portas en las paralelas y hacemos la tinción de gram y
seguiremos estos pasos;
4.1;
Cubrimos la preparación con cristal violeta, durante un minuto. Tras pasar este
tiempo, lo lavamos con agua destilada
4.2;
Ponemos lugol, con un periodo de 1 min. Y volvemos a lavar con agua destilada
4.3;
Le quitamos el colorante con alcohol-acetona y lavamos con mucha agua para que
no quede rastro de alcohol
4.4;
Echamos el colorante que hará de contraste echando safranina (1 min 30 seg) y
fusina (2 mins)
4.5;
Tras haber hecho ya todo esto es el momento de lavar con agua destilada, secar
y mirar el resultado a través del microscopio empleando aceite de inmersión
Resultado:
Si hemos
realizado correctamente todo este procedimiento podremos apreciar la morfología
de las bacteria que estamos estudiando. Además apreciamos que si usamos
bacteria G(+), estas habrán cogido un color azulado; no obstante si la muestra
es G(-) el color de las bacterias será morado
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