Antibiograma

Objetivo:

En esta práctica vamos a realizar un antibiograma; se denomina así al conjunto de técnicas, empleadas en el laboratorio, para determinar el grado de sensibilidad de los microorganismos frente a unos antimicrobianos. Emplearemos el método de difusión en agar o método de Kirby-Bauer

Este método consiste en colocar discos de diferentes antibióticos, sobre placa Petri que contiene el agar con el microorganismo y tras un periodo de incubación de 18-24 horas, observar la zona o halo de inhibición que aparece rodeando al disco de antibiótico.

Materiales:

-Asa de siembra

-Hisopo de algodón

-Suero fisiológico

-Inóculo bacteriano

-Medio Müeller-Hinton

-Discos con antibiótico

Procedimiento:

Se prepara un cultivo de 18 horas, de las bacterias que hay que ensayar, en agar tripticasa soja (TSA)

Realizamos un inóculo bacteriano, con una turbidez de 0,5 de la escala de McFarland, cogiendo unas 3-4 colonias y las resuspenderemos en 3-4 ml de suero.

Sumergir, en el inóculo, un hisopo de algodón y eliminar el exceso presionándolo sobre la pared interna del tubo que lo contiene y por encima del nivel del caldo de cultivo.

Inocular la superficie de una placa de agar de Müeller-Hinton con el hisopo, pasándolo uniformemente por toda la superficie en tres direcciones. Por último pasar el hisopo por el reborde la placa de agar. Dejar secar 5 minutos.

Con unas pinzas estériles, colocar los discos de antibiótico sobre la superficie del agar apretándolos suavemente.

Incubar la placa en posición invertida a 37° C durante 18-24 horas.

Medir los diámetros de las zonas de inhibición con una regla.Los discos que hemos utilizado han sido: