API 20E
Descripción
La batería de pruebas API20E es un sistema de identificación rápida para bacterias de la familia Enterobacteriaceae y otras bacterias Gram (-). Consta de 21 test bioquímicos estandarizados y miniaturizados y una base de datos. Cuya ventajas de ser rápido, eficaz y de permitir realizar numerosas pruebas a la vez. Cada tira de API 20E contiene 20 microtubos o pocillos con distintos sustratos deshidratados. Cada tubo es una prueba bioquímica distinta.
Los microtubos se inoculan con una suspensión de microorganismos, en agua o solución salina, que rehidrata los medios. Las tiras o galerías se incuban a 37°C y por efecto del metabolismo bacteriano se producen cambios de color espontáneos o bien por la adicción de reactivos.
Para hacer la lectura de las reacciones tenemos que comparar con una tabla de lectura donde se indica si los microorganismos deben considerarse positivos o negativos para cada reacción según el color aparecido.
Procedimiento:
En primer lugar tenemos que preparar una suspendión homogenea por lo que vamos a tomar una colonia bien aislada de cada microorganismo y resuspenderla homogéneamente en 5 mL de solución salina
Llenar con la suspensión de bacterias los tubos, no la cúpula, de todos los pocillos.
Llenar la cúpula de los pocillos CIT , VP, GEL con la suspensión de bacterias.
Llenar con parafina las cúpulas de los pocillos ADH, LDC, ODC, URE, H2S para obtener anaerobiosis.
Poner la tira en su propia cámara húmeda de incubación. Previamente poner agua en los alvéolos de la cámara para proporcionar una atmósfera húmeda durante la incubación.
Incubar a 37 °C durante 18-24 h.
La lectura de los resultados se lleva a cabo por comparación de los colores de cada pocillo con los de las tablas de lectura. En caso de que 3 o más ensayos,resultasen positivos, anotar en la hoja de resultados todas las reacciones espontáneas y después revelar los ensayos que necesitan la adición de reactivos:
TDA: Añadir una gota de FeCl3 10 %. Positivo = color marrón oscuro.
VP: Añadir una gota del reactivo 1 (KOH al 40%) y una gota del reactivo 2 (C2 H5 OH). Positivo = color rosa fuerte o rojo en 5 minutos.
VP: Añadir una gota del reactivo 1 (KOH al 40%) y una gota del reactivo 2 (C2 H5 OH). Positivo = color rosa fuerte o rojo en 5 minutos.
Oxidasa: Añadir una gota del reactivo (tetrafenilendiamina) recién preparado. Positivo = color azul que aparece inmediatamente
Glu: Prueba de reducción de nitratos a nitritos (NO2) y en nitrógeno (N2).
Añadir una gota de los reactivos NIT 1 y NIT 2 en el tubo GLU y esperaramos 2 minutos.
Una coloración roja indica una reacción positiva. Si no vira, se añade un poco de zinc y se observa si aparece color o permanece incoloro.
Resultado:
Del conjunto de reacciones y resultados se obtiene un perfil numérico de 7 cifras. Los pocillos están separados en grupos de tres: en total tenemos 7 grupos de tres tubos o tripletes. A cada pocillo se le da el valor 0, 1, 2 o 4.
Si la reacción es negativa se pone 0. Si la reacción es positiva se pone: 1 si es el primer pocillo de un triplete, 2 si es el segundo, 4 si es el tercero. Se suman los valores de cada triplete y se obtiene un código de 7 cifras. Con este código se busca en la tabla de identificación la especie de que se trata.
Galería:
